植物氨基糖苷类-3-磷酸转移酶(NPT)ELISA试剂盒

植物氨基糖苷类-3-磷酸转移酶（NPT）酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用       目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中氨基糖苷类-3-磷酸转移酶（NPT）含量。

实验原理：

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物氨基糖苷类-3-磷酸转移酶（NPT）水平。用纯化的植物氨基糖苷类-3-磷酸转移酶（NPT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入氨基糖苷类-3-磷酸转移酶（NPT），再与HRP标记的氨基糖苷类-3-磷酸转移酶（NPT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的氨基糖苷类-3-磷酸转移酶（NPT）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物氨基糖苷类-3-磷酸转移酶（NPT）浓度。

试剂盒组成：

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1.         标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为120 U/L,80 U/L ,40 U/L L,20 U/L,10 U/L）。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

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