SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳） 主要用于蛋白质的分离和分析。其基本原理是利用蛋白质在SDS作用下失去天然构象并带上负电荷，在电场中按分子量大小进行分离。SDS-PAGE定量则是在此基础上，通过特定的成像技术和软件分析，实现对蛋白质的定量分析。SDS-PAGE定量能够准确测定蛋白质的浓度和纯度，这在蛋白质表达与纯化过程中尤为关键。通过SDS-PAGE定量，研究人员可以明确被分离蛋白质的浓度，进而进行更深入的功能与结构研究。此外，SDS-PAGE定量在蛋白质组学研究中也扮演着重要角色。通过对不同实验组蛋白质表达量的比较，科研人员可以探究生物过程的变化，识别潜在的生物标志物和治疗靶点。最后，SDS-PAGE定量也广泛应用于生物制药领域，帮助监测和控制制剂中的蛋白质成分，以确保其质量和疗效。

一、常见的SDS-PAGE定量方法

1、考马斯亮蓝染色结合光密度扫描定量

考马斯亮蓝可以与蛋白质结合，结合量与蛋白质含量成正比。经过 SDS-PAGE 分离后的蛋白质条带，用考马斯亮蓝染色后，蛋白质条带会呈现出蓝色。通过光密度扫描仪对染色后的凝胶进行扫描，测定每个条带的光密度值（OD 值）。光密度值与蛋白质的含量在一定范围内呈线性关系，因此可以根据标准蛋白质的光密度值绘制标准曲线，进而根据样品条带的光密度值计算出样品中蛋白质的含量。

（1）操作流程：准备一系列已知浓度的标准蛋白质样品，进行 SDS-PAGE 电泳。同时，将待测样品也进行 SDS-PAGE 电泳。电泳结束后，对凝胶进行考马斯亮蓝染色，染色后进行脱色处理，使背景清晰。然后，使用光密度扫描仪扫描凝胶，得到标准蛋白质和样品蛋白质条带的光密度值。以标准蛋白质的浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。最后，根据样品条带的光密度值，在标准曲线上查找对应的蛋白质浓度。

（2）特点：这种SDS-PAGE定量方法操作相对简单，成本较低，但灵敏度有限，对于低丰度蛋白质的定量不够准确。而且，不同蛋白质与考马斯亮蓝的结合能力可能存在差异，会对定量结果产生一定的影响。

2、银染色结合图像分析定量

银染色是一种非常灵敏的蛋白质染色方法，它通过银离子与蛋白质结合，然后将银离子还原成金属银，使蛋白质条带呈现出黑色或棕色。其染色强度与蛋白质的含量成正比。通过图像分析软件对银染色后的凝胶图像进行分析，测量每个条带的灰度值，灰度值与蛋白质含量相关，同样可以利用标准蛋白质绘制标准曲线，对待测样品进行SDS-PAGE定量。

（1）操作流程：先将标准蛋白质样品和待测样品进行SDS-PAGE电泳，电泳后进行银染色。染色完成后，使用图像采集设备（如凝胶成像系统）获取凝胶图像。将图像导入图像分析软件，对标准蛋白质条带和样品蛋白质条带进行分析，测量其灰度值。绘制标准曲线并计算样品中蛋白质的含量。

（2）特点：银染色的灵敏度比考马斯亮蓝染色高很多，适用于低丰度蛋白质的定量。但银染色的操作相对复杂，而且银染色的线性范围较窄，对于高浓度蛋白质的定量可能不太准确。此外，银染色过程中一些因素（如染色时间、温度等）可能会影响染色结果的重复性。

3、荧光标记定量

在进行SDS-PAGE定量之前，将蛋白质样品用荧光染料进行标记，标记后的蛋白质在凝胶中分离后，通过荧光成像系统检测荧光信号强度。荧光信号强度与蛋白质的含量成正比，利用已知浓度的标准蛋白质作为对照，绘制标准曲线，从而对待测样品中的蛋白质进行定量。

（1）操作流程：选择合适的荧光染料对标准蛋白质和待测蛋白质样品进行标记，按照标记试剂的说明书进行操作。标记后的样品进行 SDS-PAGE电泳，电泳结束后，将凝胶置于荧光成像系统中进行扫描，获取荧光图像。使用图像分析软件分析标准蛋白质和样品蛋白质条带的荧光强度，绘制标准曲线并计算样品蛋白质浓度。

（2）特点：荧光标记定量具有较高的灵敏度和准确性，荧光信号的线性范围较宽，可用于不同浓度范围蛋白质的定量。而且荧光标记相对特异性较好，受蛋白质种类的影响较小。不过，荧光染料和荧光成像设备的成本较高，操作过程中需要注意避免荧光淬灭等问题。

二、SDS-PAGE定量常见问题与解决方案

1、条带不清晰或扩散

可能是因为凝胶浓度不适当或电泳条件不佳。应根据目标蛋白调整凝胶配方，并验证电泳设备的电压和电流稳定性。

2、样品降解

确保样品新鲜并在低温下保存，适当加入蛋白酶抑制剂。

3、定量结果不准确

需要进行多次重复实验以确保结果的可靠性，并使用标准曲线进行校正。

SDS-PAGE定量具有操作简便、灵敏度高、重复性好的优点。特别是在多种蛋白质同时定量时，能够提供快速且可靠的结果。百泰派克生物科技致力于为科研工作者提供高效、精准的SDS-PAGE定量服务。我们拥有经验丰富的专业团队，能够根据客户需求定制最合适的实验方案。通过先进的图像分析软件和严格的质量控制流程，确保结果的准确与高效。无论是基础研究还是应用开发，我们都将为您提供强有力的技术支持，助力您的科研项目取得成功。欢迎与百泰派克合作，共同探索蛋白质科学的奥秘。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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